В сфере исследований и разработок пептидов чистота каталога пептидов имеет первостепенное значение. Как специализированный поставщик пептидов каталога, мы понимаем значение обеспечения высококачественных продуктов для наших клиентов. Иногда, несмотря на все наши усилия в начальных процессах синтеза и очистки, может возникнуть необходимость в дальнейшей очистке пептидов каталога. В этом блоге мы при необходимости рассмотрим различные методы и соображения для дальнейшего очищающегося пептидов каталога.
Почему дальнейшая очистка?
Есть несколько причин, по которым может потребоваться дальнейшая очистка пептидов каталога. Во -первых, в приложениях для исследований, таких как анализы на основе клеток, исследования in vivo или исследования структурной биологии, даже следы примесей следы могут оказать существенное влияние на экспериментальные результаты. Примеси потенциально могут мешать биологической активности пептида, что приводит к ложным срабатыванию или отрицательным.
Во -вторых, нормативные требования в некоторых отраслях, таких как фармацевтические препараты, требуют очень высокого уровня чистоты для пептидов, используемых при разработке лекарств. Если пептид рассматривается как потенциальный терапевтический агент, любые примеси могут представлять риски для безопасности пациентов, и, следовательно, дополнительные стадии очистки необходимы.
Хроматографические методы
Обратный - фаза высокая - производительность жидкая хроматография (RP - ВЭЖХ)
RP - ВЭЖХ является одним из наиболее широко используемых методов для очистки пептидов. Он отделяет пептиды на основе их гидрофобности. Стационарная фаза в RP - ВЭЖХ представляет собой гидрофобный материал, обычно на основе кремнезема с прикрепленными алкильными цепями (например, C18 или C8). Пептиды с различной гидрофобностью будут по -разному взаимодействовать со стационарной фазой, что приведет к различным временам удержания.
Для дальнейшей очистки каталога пептидов с использованием RP - ВЭЖХ нам сначала необходимо выбрать подходящую мобильную фазу. Общая подвижная фаза состоит из смеси воды и органического растворителя, такой как ацетонитрил или метанол, с добавлением небольшого количества кислоты (например, трифторуксусная кислота, TFA) для улучшения формы пика. Регулируя градиент органического растворителя, мы можем оптимизировать отделение целевого пептида от примесей.
Например, если у нас есть пептид каталогаLL-37, антимикробный пептид, который является антимикробным пептидом с потенциальными терапевтическими применениями, RP - ВЭЖХ может использоваться для удаления любого оставшегося синтеза с помощью продуктов или разлагаемых фрагментов. Очищенный LL - 37 может затем использоваться в более точных анализах антимикробной активности.
Ион - обмен хроматографией
Ион - обменная хроматография отделяет пептиды на основе их заряда. Существует два основных типа: катион - обменная хроматография (CEX) и анион - обменная хроматография (AEX). В CEX стационарная фаза имеет отрицательно заряженную группу, и пептиды с чистым положительным зарядом будут связываться с ней. В AEX стационарная фаза положительно заряжена, и отрицательно заряженные пептиды будут сохранены.
Выбор между CEX и AEX зависит от изоэлектрической точки (PI) пептида. Если PI пептида находится ниже рН мобильной фазы, пептид будет иметь чистый отрицательный заряд, и может использоваться AEX. И наоборот, если PI выше рН мобильной фазы, CEX более подходит.
Например,Ureistachykinin II, Пептид с определенным профилем заряда может быть дополнительно очищен с использованием ионной хроматографии. Тщательно выбирая pH мобильной фазы и ионную прочность, мы можем добиться хорошего отделения целевого пептида от других заряженных примесей.
Электрофоретические методы
Додецилсульфат натрия - электрофорез полиакриламидного геля (SDS - Page)
Хотя SDS - Page в основном используется для анализа белка, она также может быть применена к очистке пептидов в некоторой степени. В SDS - странице пептиды денатурируются SDS и разделяются на основе их молекулярной массы. Пептиды мигрируют через полиакриламидный гель под влиянием электрического поля.
После электрофореза гель может быть окрашен для визуализации пептидов. Полоса, соответствующая целевому пептиду, может затем быть вырезана из геля, а пептид может быть элюирован из гелевой матрицы. Однако этот метод имеет некоторые ограничения. Процесс элюирования может быть сложным, и во время очистки может быть некоторая потеря пептида. Кроме того, SDS может быть трудно полностью удалить из очищенного пептида.
Капиллярный электрофорез (CE)
Капиллярный электрофорез является мощным методом разделения для пептидов. Он предлагает высокую эффективность разделения, короткое время анализа и низкое потребление образца. CE отделяет пептиды в зависимости от их соотношения заряда - к массовому соотношению. Существуют разные способы CE, такие как электрофорез капиллярной зоны (CZE), электрофорез капиллярного геля (CGE) и мицеллярная электрокинетическая хроматография (MEKC).
CZE является наиболее часто используемым режимом для пептидного анализа и очистки. В CZE пептиды разделены в буферном капилляре под электрическим полем. Разделение основано на различиях в электрофоретической подвижности пептидов. CE может сочетаться с различными методами обнаружения, такими как поглощение ультрафиолета, флуоресценция и масс -спектрометрия, для повышения точности идентификации и очистки пептидов.
Другие соображения
Растворимость
Растворимость пептида является важным фактором в процессе очистки. Если пептид имеет плохую растворимость в растворителях очистки, это может привести к осаждению во время очистки, что повлияет на восстановление и чистоту пептида. Чтобы улучшить растворимость пептида, мы можем скорректировать рН растворителя, добавить растворители или использовать специфические растворяющие агенты.
Анализ чистоты
После дальнейшей очистки крайне важно проанализировать чистоту пептида. Общие методы анализа чистоты включают высокую производительность жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), масс -спектрометрию (МС) и ядерный магнитный резонанс (ЯМР). ВЭЖХ может предоставить информацию о хроматографической чистоте пептида, в то время как МС может подтвердить молекулярную массу пептида и обнаруживать любые примеси с различными массами. ЯМР может быть использован для определения структуры и чистоты пептида на атомном уровне.
Заключение
Как поставщик пептидов каталога, мы стремимся предоставлять нашим клиентам высокое качественное пептиды. Когда необходима дальнейшая очистка пептидов каталога, у нас есть различные методы в нашей распоряжении, включая хроматографические методы, электрофоретические методы и другие соображения, такие как анализ растворимости и чистоты. Тщательно выбирая соответствующий метод очистки и оптимизируя условия очистки, мы можем гарантировать, что пептиды удовлетворяют требованиям наших клиентов с высокой чистотой.
Если у вас есть какие -либо потребности в каталоге пептидов или требуете дополнительных услуг по очистке, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам для закупок и обсуждения. Мы с нетерпением ждем возможности сотрудничать с вами, чтобы удовлетворить ваши пептидные исследования и разработки.
Ссылки
- Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Dolan, JW (2010). Введение в современную жидкую хроматографию. Уайли.
- Jorgenson, JW, & Lukacs, KD (1981). Капиллярная зона электрофорез. Аналитическая химия, 53 (8), 1298 - 1302.
- Laemmli, Великобритания (1970). Расщепление структурных белков во время сборки головы бактериофага T4. Nature, 227 (5259), 680 - 685.