Пептидные фармацевтические ингредиенты (API) привлекли значительное внимание в фармацевтической промышленности из -за их высокой специфичности, низкой токсичности и потенциала для лечения широкого спектра заболеваний. Как ведущий поставщик Peptide APIS, мы стремимся обеспечить высококачественные пептидные продукты с помощью современных методов синтеза. В этом блоге мы в углублении в различных способах синтезируются пептидные API.
Твердый - фазовый пептид синтез (SPP)
Синтез твердого - фазовый пептид является одним из наиболее широко используемых методов синтеза пептидных API. Этот подход был впервые приведен Робертом Брюсом Меррифилдом в 1963 году, который произвел революцию в синтезе пептидов и принесла ему Нобелевскую премию по химии в 1984 году.
Основной принцип SPP включает в себя прикрепление C -конца первой аминокислоты к нерастворимой твердой поддержке, такой как смола. Эта смола обеспечивает стабильную платформу для последующих химических реакций. Аминогруппа прикрепленной аминокислоты защищена подходящей защитной группой, обычно FMOC (9 - флуоренилметилоксикарбонил) или BOC (TERT - BotyloxyCarbonyl).
После того, как первая аминокислота прикреплена к смоле, защитная группа на его аминогруппе удаляется, что обнажает реактивную аминогруппу. Следующая аминокислота, также с защищенной аминогрузкой, затем связана со свободной аминогруппой ранее прикрепленной аминокислоты с использованием реагента для муфты. Обычно используемые реагенты для соединения включают DIC (N, N ' - diisopropylcarbodiimide), Hbtu (O - бензотриазол - N, N, N', N ' - тетраметил - урония - гексафлуоро - фосфат) и hatu (o - (7 - азабензолриазол - 1 -n', n ', n', n ', n', n ', n', n ', n', n ', n', n ', n', n ', n', n ', n', n '. тетраметилуроний гексафторофосфат).
После каждого этапа связи непрореагированные аминогруппы ограничены для предотвращения образования последовательностей делеции. Обычно это делается с использованием уксусного ангидрида. Цикл снятия, связывания и задержки повторяется для каждой аминокислоты в желаемой пептидной последовательности.
Как только вся пептидная последовательность была собрана на смоле, пептид расщепляется от смолы с использованием коктейля расщепления. Этот коктейль также удаляет любую сторону - цепь, защищающие группы, которые присутствовали на аминокислотах во время синтеза. Затем расщепленный пептид очищается такими методами, как жидкая хроматография с высокой производительностью (ВЭЖХ).
Раствор - фазовый пептид синтез
Решение - Фазовый пептидный синтез является более старым методом, но все еще имеет свои преимущества в определенных ситуациях. В этом методе все реакции происходят в растворе, а пептид не прикреплен к твердой поддержке.
Синтез начинается с защиты амино и карбоксильных групп отдельных аминокислот. Подобно SPP, защита групп, таких как FMOC или BOC, используются для аминогруппы, а эфирные группы используются для защиты карбоксильной группы.
Первым шагом является связь двух защищенных аминокислот с образованием дипептида. Это достигается с использованием реагента для муфты, аналогично тем, которые используются в SPP. После образования дипептида защищающиеся группы на одном конце дипептида удаляются, а затем соединяется с другой защищенной аминокислотой или дипептидом с образованием более длинного пептида.
Процесс повторяется шаг - на шаг, пока не будет получена желаемая пептидная последовательность. Одной из проблем раствора -фазового синтеза является очистка промежуточных пептидов на каждом этапе, поскольку реакционная смесь содержит различные по продуктам и непрореагированию начальных материалов. Очистка обычно выполняется путем экстракции, кристаллизации или хроматографии.
Химическое лигирование
Химическое лигирование является мощным методом синтеза больших пептидов или белков, которые трудно собрать с использованием традиционного SPP или синтеза раствора - фазы. Одним из наиболее хорошо известных методов химического лигирования является нативное химическое лигирование (NCL).
В NCL пептид с C -терминальным тиоэфиром реагирует с другим пептидом с N -концевым остатком цистеина. Реакция возникает в мягких водных условиях и приводит к образованию нативной пептидной связи между двумя пептидами.
Процесс включает в себя сначала синтезирование двух или более пептидных сегментов с использованием SPP или синтеза раствора - фазы. Один сегмент готовится с помощью C - терминального тиоэфира, а другой с N - терминальным цистеином. Эти сегменты затем смешиваются в подходящем буфере, и происходит реакция лигирования. После лигирования, при необходимости, остаток цистеина может быть дополнительно изменен или использован в качестве ручки для дополнительных химических реакций.
Конвергентный синтез
Конвергентный синтез - это стратегия, которая сочетает в себе преимущества как SPP, так и химического лигирования. Вместо синтеза всей пептидной последовательности линейным образом пептид делится на меньшие сегменты, которые синтезируются отдельно с использованием SPP.
Эти сегменты затем лигируются вместе с использованием методов химического лигирования. Этот подход уменьшает количество стадий связи, необходимых для синтеза больших пептидов, что может улучшить общий выход и чистоту конечного продукта. Например, длинный пептид может быть разделен на три или четыре сегмента, каждый из которых содержит 10 - 20 аминокислот. Эти сегменты синтезируются на смоле, расщепляются, а затем лигируются конвергентным образом.
Примеры наших пептидных API
Мы предлагаем широкий спектр пептидных API, включаяC20 - OTB - Glu (OBBU) - ATBI10 - ATBU) Фотографии - OOE - OANA - OEВC20(OtBu) - Glu(OtBu), иPalmitoyl - Glu(OSu) - OtBuПолем Эти пептиды синтезируются с использованием современных методов, описанных выше, обеспечивая высокую чистоту и качество.
Контроль качества при синтезе пептидного API
Контроль качества имеет первостепенное значение в синтезе пептидных API. У нас есть комплексная система контроля качества, чтобы обеспечить соответствие наших продуктов самым высоким стандартам.
После синтеза пептид анализируется различными методами, включая ВЭЖХ, масс -спектрометрию (МС) и ядерный магнитный резонанс (ЯМР). ВЭЖХ используется для определения чистоты пептида, в то время как MS используется для подтверждения молекулярной массы пептида. ЯМР может предоставить информацию о структуре и конформации пептида.
Мы также проводим исследования стабильности, чтобы гарантировать, что пептидные API оставались стабильными в различных условиях хранения. Это включает в себя тестирование пептида при разных температурах, значениях рН и в присутствии различных наполнителей.
Заключение
Синтез пептидных API - это сложный и многокачественный процесс, который требует передовых методов и строгого контроля качества. Как поставщик пептидных API, мы постоянно изучаем новые методы и технологии, чтобы повысить эффективность и качество нашего синтеза. Будь то с помощью синтеза твердофазного пептида, синтеза раствора - фазы, химического лигирования или конвергентного синтеза, мы стремимся предоставить нашим клиентам высококачественные пептидные продукты.
Если вы заинтересованы в покупке наших пептидных API или у вас есть какие -либо вопросы о синтезе пептидов, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам для обсуждений закупок. Мы с нетерпением ждем возможности поработать с вами, чтобы удовлетворить ваши потребности в пептидном API.
Ссылки
- Fields, GB, & Noble, RL (1990). Твердый - фазовый пептид синтез с использованием 9 - флуоренилметоксикарбонильные аминокислоты. Международный журнал исследований пептидов и белков, 35 (2), 161 - 214.
- Dawson, PE, Muir, TW, Clark - Lewis, I. & Kent, SBH (1994). Синтез белков с помощью нативного химического лигирования. Science, 266 (5186), 776 - 779.
- Chan, WC, & White, PD (2000). Синтез твердофазного пептида FMOC: практический подход. Издательство Оксфордского университета.